种质资源保存方法之三缓慢生长保存法
19.09.2014 20:02
本文来源: 林业厅
1低温保存法
低温保存法是植物组织培养物缓慢生长保存最常用的方法。利用低温对植物生命活动有抑制作用而进行的保存。所用的温度一般为l~10℃，在这个温度范围内，植物细胞生长很慢但并未停止。
在低温保存植物培养物过程中，正确选择适宜低温是保存后高存活率的关键。大量试验研究表明，不同植物乃至同一种植物不同基因型对低温的敏感性不一样。植物对低温的耐受性不仅取决于基因型，也与其生长习性有关。通常认为，温带植物在0~6℃下保存，而热带植物最适低温为15~20℃。
2高渗透压保存法
在培养基中添加一些高渗化合物，如蔗糖、甘露醇、山梨醇等，也是一种常用的缓慢生长保存手段。这类化合物提高了培养基的渗透势负值，造成水分逆境，降低细胞膨压，使细胞吸水困难，减弱新陈代谢活动，延缓细胞生长。不同植物培养物保存所需要渗透物质含量不一样，但试管苗保存时间、存活率、恢复生长率受培养基中高渗物质含量影响的变化趋势基本相同，呈抛物线型。一般情况卜，这类化合物在保存早期对试管苗存活率影响不大，但随着时间的延长，对延缓培养物生长，延长保存时间的作用愈加明显。
3生长抑制剂(或延缓剂)保存法
生长抑制剂是一类天然的或人工合成的外源激素，具有很强的抑制细胞生长的生理活性。在培养基中加入一些生长延缓剂来延缓或抑制细胞生长，改变培养材料的生长速度，延长继代周期。目前，常用的生长抑制剂种类有，氯化氯胆碱(矮壮素，CCC)、N-二甲基胺墟拍酸(B9)、多效唑(PP333)、高效唑(S3307)、脱落酸(ABA)、二碘苯酸(TIBA)、磷甘酸、甲基丁二酸、青鲜素(MH)等。
由于培养物本身的遗传基础、来源、生理状况、内源激素水平以及培养条件(培养基成分、光照、温度等)的差异，适用于各种果树种质的生长抑制剂保存的通用配方，目前未见报道。
4降低氧分压保存法
低 氧分压用于植物组织培养物保存的想法是由Caplin提出的。Bridge and staby首次报道采用降低培养物周围的大气压力或改变氧含量来保存植物组织培养物。Dorion的研究表明，桃及桃和柠檬的杂种茎尖培养物在0℃、低氧0.20%~0.25%条件下保存12个月，不仅全部成活，而且后期再生能力强;12℃，25℃缺氧环境可代替低温保存4~6月。目前，有些学者极力倡导这种保存技术。然而，有关培养物低氧对细胞代谢功能影响还有待研究。
5调整培养基中的养分含量
植物生长发育状况依赖于外界养分的供给，如果养分供应不足，植物生长缓慢，植株矮小。通过调整培养基的养分水平，可有效地限制细胞生长。葡萄茎尖培养物在低含量硝酸钱的MS培养基上，标准的培养条件下保存262~290d的存活率比在低温(5~10℃)下的MS培养基上保存率要高。一些研究还表明，培养基中碳源种类及含量严重影响培养物保存效果。用1%果糖代替2%蔗糖的培养基明显减缓番木瓜芽培养物生长，保存12个月后，100%芽体恢复生长。
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19.09.2014 20:02
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